Единое окно доступа к образовательным ресурсам

Масс-спектрометрия и определение массы больших молекул

Голосов: 0

Изложены фундаментальные основы масс-спектрометрии и ее достижения в определении молекулярных масс больших молекул.

Приведенный ниже текст получен путем автоматического извлечения из оригинального PDF-документа и предназначен для предварительного просмотра.
Изображения (картинки, формулы, графики) отсутствуют.
                                                                                      ХИМИЯ

                                      МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ
                             И ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССЫ БОЛЬШИХ МОЛЕКУЛ

                                                                             Л. Н. СИДОРОВ
                                            Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова



                                                                                                     В качестве введения к статье попробуем дать общее
                                                                                                представление о современной масс-спектрометрии и
                       MASS-SPECTROMETRY                                                        том перевороте, который произошел в этой области
                       AND MASS DETERMINATION                                                   науки в 80-е годы. Именно в то время был найден метод
                       OF LARGE MOLECULES                                                       перевода в газовую фазу нелетучих органических соеди-
                                                                                                нений в виде ионов и масс-спектрометрия превратилась
                       L. N. SIDOROV                                                            в универсальный метод определения молекулярных
                                                                                                масс больших молекул, несмотря на то что большинст-
                       A fundamental principal of mass spectrometry                             во из них претерпевают деструкцию при термическом
                       and recent advances in molecular mass deter-                             нагреве. К 1991 году был осуществлен принципиально
                       mination of giant molecules are reviewed.                                новый подход к ионизации нелетучих соединений с со-
                                                                                                хранением их молекулярной целостности, то есть без
                                                                                                термической деструкции больших молекул. Почти все
                       Изложены фундаментальные основы масс-
                                                                                                крупнейшие фирмы научного приборостроения заинте-
                       спектрометрии и ее достижения в опреде-                                  ресованы в выпуске используемых для этого метода
                       лении молекулярных масс больших молекул.                                 приборов (упомянем “Fisons Instruments”, “Hewlett Pac-
                                                                                                kard”, YEOL, “Varian”, “Spectrospin”, “Finigan Mat”,
                                                                                                “Brucker”, “Atomika Instruments”, M-SCAN, “G\B Sci-
                                                                                                entific Inc.”). Возросло число параметров, требующихся
                                                                                                при создании этих приборов: точное измерение масс,
                                                                                                ультравысокое разрешение, наличие всех методов ио-
                                                                                                низации – электроискровой, матричной лазерной де-
                                                                                                сорбционной (MALDI), электрораспыление (ESI),
                                                                                                электронного удара (EI) и химической (CI). По капита-
                                                                                                ловложениям в научное приборостроение масс-спект-
                                                                                                рометрия занимает второе место после оптических спе-
                                                                                                ктральных приборов, куда входят и лазеры.
                                                                                                    После этого небольшого вступления перейдем к
                                                                                                последовательному рассмотрению масс-спектральной
                                                                                                аппаратуры. Масс-спектрометр – это устройство, поз-
                                                                                                воляющее разделить пучок заряженных частиц с помо-
                                                                                                щью электрического и магнитного поля на фракции с
© Сидоров Л.Н., 2000




                                                                                                одинаковым отношением массы к заряду (m / e) и опре-
                                                                                                делить массу иона. Первый такой прибор построил
                                                                                                Д.Д. Томпсон в 1907 году, второй – Ф. Астон. На приборе
                                                                                                Астона был впервые определен изотопный состав боль-
                                                                                                шинства элементов Периодической системы и проде-
                                                     www.issep.rssi.ru                          монстрировано, что масс-спектрометр является уни-
                                                                                                кальным прибором для определения атомных и



                                   С И Д О Р О В Л . Н . М А С С - С П Е К Т Р О М Е Т Р И Я И О П Р Е Д Е Л Е Н И Е М А С С Ы Б О Л Ь Ш И Х М О Л Е К УЛ   41


                                                                  ХИМИЯ
     молекулярных масс. В настоящее время масс-спектро-                                                                  2
     метрия широко используется в научных исследованиях.
     Мы остановимся лишь на ее применении для определе-
     ния молекулярных масс больших молекул, насчитываю-
     щих десятки тысяч атомных единиц. Подробно ознако-
     миться с типами масс-спектрометров, современными
     методами ионизации и применениями этой техники в
     исследовании органических соединений можно в [1].
         Сначала несколько слов о типах и основных харак-                                  ϕ                             β
                                                                                                                     α       γ
     теристиках современных масс-спектрометров. Рассмот-                                  1                                        3
     рим простую блок-схему, общую для всех масс-спект-
     рометров. Основной узел масс-спектрометра – масс-                               Рис. 1. Фокусирующее действие секторного поля:
     анализатор, где под действием электрического и маг-                             1 – источник ионов; 2 – секторное магнитное поле;
     нитного поля происходит процесс разделения пучка                                3 – детектор; ϕ – угол расходимости ионного пучка с
     ионов на фракции с одинаковым отношением массы к                                одинаковым массовым числом М
     заряду (m / e). Поскольку анализировать можно только
     заряженные пучки, а в большинстве случаев нужно ис-                       Сила Лоренца заставляет ион отклоняться от прямоли-
     следовать нейтральные частицы, необходимо превра-                         нейного движения и выводит его на круговую орбиту
     тить их в ионы. Для этого служит ионный источник, в                       радиуса r : e ⋅ υH = m ⋅ υ2 / r. Подставляя значение υ, по-
     котором нейтральные частицы подвергаются иониза-                          лучаем r = 1/ H(2m ⋅ U / e)1/2.
     ции. Существует большое количество методов иониза-                             Таким образом, частицы с различными m / e по-раз-
     ции, на которых остановимся подробно в следующем                          ному отклонятся в магнитном поле и окажутся в раз-
     разделе. Наконец, третья обязательная деталь – регист-                    ных точках детектора. Если детектор – фотопластина,
     рирующее устройство, с помощью которого можно оп-                         мы получим на фотографии масс-спектр пучка ионов.
     ределить количество ионов с данным m / e. Это могут                       В большинстве масс-спектрометров используют другой
     быть фотопластина (масс-спектрограф), электрометр                         прием: радиус r оставляют постоянным, а сканирова-
     или электронный умножитель (масс-спектрометр). В                          ние по массам производят изменяя H. Фокусирующее
     современном приборе регистрирующее устройство не-                         действие секторного магнитного поля проиллюстриро-
     посредственно связано с компьютером, который про-                         вано на рис. 1. Как видно из рис. 1, фокусировка осу-
     изводит обработку результатов и управляет экспери-                        ществляется по углу, то есть ионы, имеющие одинако-
     ментом.                                                                   вое значение m / e, но входящие под разными углами в
         Масс-спектрометр – вакуумный прибор, снабжен-                         магнитное поле, после прохождения этого поля снова
     ный специальной системой откачки. В масс-анализа-                         собираются в одну точку. На практике происходит не-
     торе заряженные частицы должны проходить расстоя-                         которое уширение изображения, и последнее получило
     ние в несколько метров, не сталкиваясь с молекулами                       название “сферическая аберрация”. Хроматическая
     остаточных газов. Для этого требуется вакуум 10− 5 Па.                    аберрация связана с разбросом ионов по энергии. При-
     На лучших моделях современных приборов достига-                           боры, в которых осуществляется фокусировка ионов
     ется разрежение 10− 7 Па. Масс-анализаторы принято                        как по углу, так и по энергии (скорости), называются
     делить на статические и динамические. Статические                         приборами с двойной фокусировкой. Эти приборы по
     приборы используют постоянное, а динамические –                           техническим характеристикам существенно превосхо-
     переменное электрическое и магнитное поле. Основ-                         дят приборы с одной фокусировкой. Основными ха-
     ные принципы работы масс-спектрометра и его харак-                        рактеристиками масс-спектрометров являются диапа-
     теристики удобно проиллюстрировать на простейшем                          зон измеряемых масс и разрешающая способность
     масс-спектрометре с магнитным анализатором сек-                           (разрешение). Разрешающая способность 1000 означа-
     торного типа (рис. 1), созданном еще в довоенные годы                     ет, что сигналы, отвечающие m / e, равные 1000 и 1001,
     А.Дж. Демпстером. Пучок ионов из ионизационной                            будут фиксироваться отдельно на регистрирующем ус-
     камеры проходит постоянную разность потенциалов                           тройстве, и их перекрывание не будет превышать 10%
     U = 3–5 кВ и попадает в однородное магнитное поле                         от полусуммы их интенсивностей (уровень фона). В
     напряженности H. Здесь на него действует сила Лоренца                     некоторых случаях разрешение указывается для 50%
     F = e[H ⋅ υ], где e – заряд частицы, υ – ее скорость. Все                 уровня фона. В наиболее распространенных и относи-
     ионы одинакового заряда приобретают одинаковую                            тельно дешевых статических приборах диапазон изме-
     кинетическую энергию Екин = U ⋅ e, и их скорость связа-                   ряемых масс лежит в интервале 500–1500 атомных
     на с массой известным соотношением υ = (2U ⋅ e / m)1/2.                   единиц массы, а разрешение – в интервале 200–800.



42                              С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 1 1 , 2 0 0 0


                                                                ХИМИЯ
Более дорогие статические масс-спектрометры с двой-                           зация происходит при столкновении пучка электронов
ной фокусировкой имеют разрешающую способность                                с энергией 40–80 эВ с молекулами исследуемого веще-
до нескольких тысяч и диапазон измеряемых масс,                               ства. Время взаимодействия электрона с молекулой по-
превышающий 10 000 а.е.м. В последние десятилетия                             рядка 10−18 с, и в результате образуется молекулярный
широкое применение нашли времяпролетные масс-                                 положительный ион, а избыточная кинетическая энер-
спектрометры и приборы ион-циклотронного резо-                                гия уносится двумя электронами. Если время жизни
нанса. Во времяпролетном масс-спектрометре (ВПМ,                              образующегося молекулярного иона меньше 10− 6 с, то
английское сокращение – TOFMS от Time of Flight                               он не достигает регистрирующего устройства и отсутст-
Mass-Spectrometers) пучок ионов, пройдя ускоряющую                            вует в масс-спектре. В этом случае фиксируются лишь
разность потенциалов (несколько киловольт), летит в                           продукты распада молекулярного иона, время жизни
бесполевом пространстве к детектору. Под действием                            которых превышает 10− 6 с. Этот процесс называется
одинакового ускоряющего напряжения ионы с разным                              фрагментацией, а продукты распада – фрагментарны-
m / e приобретают разную скорость и регистрируются в                          ми или осколочными ионами.
разное время. Таким образом происходит разделение                                 Метод фотонного удара по существу аналогичен
по отношению массы к заряду.                                                  методу электронного удара, но эффективность иониза-
     Времяпролетные масс-спектрометры работают в им-                          ции на два-три порядка ниже. Вся избыточная кинети-
пульсном режиме, длительность импульса около 10− 4 с.                         ческая энергия уносится одним выбитым электроном,
Они незаменимы при исследовании процессов, быстро                             и поэтому пороговые законы, то есть зависимость ин-
протекающих во времени. В лучших образцах диапазон                            тенсивности ионного тока от энергии бомбардирую-
измеряемых масс и разрешающая способность дости-                              щих частиц, отличаются для фотонного и электронного
гают нескольких тысяч. Именно на времяпролетном                               удара. Фотонный удар оказывается существенно более
масс-спектрометре удалось впервые зарегистрировать                            точным при определении таких величин, как потенци-
фуллерены, полученные при лазерном испарении гра-                             алы ионизации. Если вернуться к проблеме ионизации
фита [2].                                                                     термически нестойких соединений, то оба метода бес-
     Приборы ион-циклотронного резонанса имеют ре-                            перспективны. Для ионизации труднолетучих соедине-
кордно высокую разрешающую способность, достига-                              ний в аналитической химии применяются искровая и
ющую нескольких миллионов. В этих приборах ионы                               лазерная ионизация вещества. Ионизации подвергает-
дрейфуют из ионного источника в резонансную по-                               ся твердое вещество. В искровом источнике испарение
лость под действием постоянного магнитного H и                                и ионизация исследуемого вещества происходят за счет
электрического E полей, направленных перпендику-                              искрового разряда, зажигающегося между электродами
лярно друг к другу. Траектория движения – циклоида,                           при разности потенциалов между ними от 3 до 5 кВ. На
являющаяся результатом равномерного прямолиней-                               одном из электродов находится сам образец. Лазерная
ного движения и движения по окружности с цикло-                               ионизация производится путем импульсного лазерно-
тронной частотой (угловой скоростью) ω = eH / m. В ре-                        го нагрева твердого вещества, и образующийся плаз-
зонансной полости ионный пучок попадает под                                   менный пучок направляется в масс-анализатор. В этих
действие поляризованного радиочастотного поля час-                            условиях происходит полное разрушение химических
тоты ν. При равенстве ω /2π = ν наступает резонанс,                           соединений, и в масс-спектре фиксируются лишь
происходит поглощение энергии поля ионами. При                                атомные ионы и определяется элементный состав об-
постоянной ν, меняя H, можно достичь резонанса по-                            разца. Похожие результаты можно получить производя
следовательно по различным m / e. Из изложенного лег-                         испарение и ионизацию твердого вещества ионами или
ко видеть, что современные масс-спектрометры позво-                           нейтральными атомами с энергией в несколько кило-
ляют определять массы тяжелых молекул вплоть до                               вольт. Все эти методы хороши и широко применяются
сотен а.е.м. с точностью до одной массовой единицы.                           для элементного анализа.
Но здесь следует заметить, что масс-спектрометр рабо-                             Метод поверхностной ионизации позволяет полу-
тает только с заряженными частицами и определяет                              чать ионы при термической ионизации веществ на по-
именно их массы. Нас же интересует масса самих моле-                          верхности металлов. Обычно используются металлы
кул, поэтому необходимым промежуточным звеном                                 с высоким значением работы выхода электрона, и по-
является ионизация молекул.                                                   верхность отбирает электрон у соединения, адсорбиро-
     Рассмотрим существующие методы ионизации и                               ванного на этой поверхности. Очевидно, что все эти
проанализируем возможность их применения для ио-                              методы не дают возможности провести ионизацию тер-
низации труднолетучих и термически нестойких (неле-                           мически нестойких веществ.
тучих) соединений. Наиболее широко применяется до                                 Наиболее распространенный метод электронного
настоящего времени метод электронного удара. Иони-                            удара сопровождается фрагментацией, что в большой



                 С И Д О Р О В Л . Н . М А С С - С П Е К Т Р О М Е Т Р И Я И О П Р Е Д Е Л Е Н И Е М А С С Ы Б О Л Ь Ш И Х М О Л Е К УЛ   43


                                                                  ХИМИЯ
     степени связано с энергией возбуждения молекулярно-                       Масс-спектр давал “отпечатки пальцев” каждого орга-
     го иона, получаемой при электронном ударе. Поэтому                        нического соединения и позволял распознать его в при-
     появился интерес к мягкой ионизации, то есть к иони-                      родных соединениях. Однако все это было справедливо
     зации без фрагментации.                                                   только тогда, когда вещество можно было перевести в
         К методам мягкой ионизации относится химическая                       газовую фазу, минуя процесс термической деструкции
     ионизация. При химической ионизации образование                           самого соединения. Большинство тяжелых органичес-
     ионов происходит за счет ион-молекулярных газовых                         ких молекул оказались недоступными для исследова-
     реакций. Метод хорош в тех случаях, когда исследуемое                     ния. К началу 80-х годов стало очевидно, что наиболее
     вещество А – газ. В ионизационную камеру вместе с А                       серьезное ограничение масс-спектрального метода
     напускают газ-реагент R, причем давление R около                          связано с получением масс-спектров нелетучих соеди-
     150 Па, давление А 1,5 ⋅ 10− 3 Па. Первоначально произ-                   нений. Масс-спектрометрическим методом можно оп-
     водится ионизация газа-реагента электронным ударом,                       ределять молекулярную массу и структуру только тех
     затем протекают ион-молекулярные реакции вида                             сложных органических веществ, которые легко перехо-
                                                                               дят в парообразное состояние, что резко сужает пере-
                        R+ + A = A+ + R                                        чень возможных объектов исследования. Поиск путей
         Большая часть образующихся ионов молекулярные                         получения в газовой фазе молекулярных или псевдо-
     и квазимолекулярные. Для пояснения термина “квази-                        молекулярных ионов нелетучих соединений, минуя
     молекулярные” рассмотрим пример с ди-n-пенти-                             стадию парообразования, представляется наиболее ин-
     ламином. В масс-спектре электронного удара основ-                         тересным этапом развития масс-спектрометрии.
     ной ион имеет m / e, равное 100, и образуется путем                            Главная идея найденного решения заключалась в
     отрыва группы С4Н9–, М = 57. При химической иони-                         использовании матрицы. Оказалось, что если большая
     зации наблюдается “квазимолекулярный” ион массой                          нелетучая молекула изолирована от “соотечественни-
     158, который образуется за счет присоединения протона                     ков” и окружена инородными телами (изолирована в
     к молекуле ди-n-пентиламина, М = 157. Здесь мы вновь                      “матрице”), то ее можно выбить из этого окружения без
     сталкиваемся с ситуацией, когда основным этапом ио-                       разрушения. При этом выбивание должно быть осуще-
     низации является получение соединения в газовой фазе.                     ствлено путем импульсной подачи большой энергии
         Другим методом мягкой ионизации является поле-                        так, чтобы молекула была выбита из матрицы частично
     вая десорбция. Полевая десорбция – это образование                        в виде ионов, как положительных, так и отрицатель-
     ионов в сильном электростатическом поле (108 В/см)                        ных, и частично с захватом некоторых элементов мат-
     за счет квантово-механического туннельного эффекта.                       рицы, то есть с образованием квазимолекулярных ио-
     Полевая десорбция может происходить при низких                            нов. Начало было положено методом, получившим
     температурах эмиттера вплоть до 4 К и не сопровож-                        название FAB (от англ. Fast Atom Bombardment – бом-
     даться диссоциацией. В результате образуются в основ-                     бардировка быстрыми атомами). Ионизация быстры-
     ном молекулярные и квазимолекулярные ионы. Так,                           ми атомами давно хорошо известна. Обычная схема
     например, в масс-спектре электронного удара ацетил-                       эксперимента заключалась в том, что проводилась ио-
     салициловой кислоты преобладают продукты диссо-                           низация атомов гелия электронным ударом. Положи-
     циативной ионизации с m / e, равным 140 и 120, а в масс-                  тельные ионы гелия разгоняли в электростатическом
     спектре полевой десорбции есть только два пика: моле-                     поле до энергий 5–10 кВ, затем ионы поступали в каме-
     кулярный с М = 180 и квазимолекулярный с М = 181,                         ру перезарядки, наполненную гелием, и в результате
     образованный путем присоединения протона к моле-                          перезарядки получали атомы гелия с энергией 5–10 кВ,
     куле ацетилсалициловой кислоты. Однако, несмотря                          которые и направляли на исследуемый твердофазный
     на определенные успехи, этот метод не получил доста-                      образец. В результате фиксировали лишь осколки того
     точно широкого применения в связи с его избиратель-                       вещества, которое находилось на поверхности. Однако
     ностью. Далеко не все молекулы отдают поверхности                         при помещении исследуемого вещества в глицерино-
     электрон при низких температурах.                                         вую матрицу удалось получить спектр нелетучих орга-
         К началу 80-х годов в масс-спектрометрии органи-                      нических молекул. Это был принципиальный прорыв в
     ческих молекул возникла двоякая ситуация. Для тех                         технике ионизации термически нестойких соединений
     молекул, которые удавалось поднять в газовую фазу,                        без их деструкции. Дальнейшее развитие привело к
     масс-спектрометрия оказалась незаменимым методом                          вытеснению этого метода технически более удобным
     исследования. В большинстве случаев удавалось опре-                       методом, получившим название MALDI (от англ. Ma-
     делить молекулярную массу, а процесс фрагментации                         trix Laser Desorption Ionization – матриксная лазерно-
     был напрямую связан с наличием тех или иных функ-                         десорбционная ионизация) – лазерная десорбция в ма-
     циональных групп и строением углеродного каркаса.                         трице. Идеальным является сочетание MALDI с время-



44                              С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 1 1 , 2 0 0 0


                                                                 ХИМИЯ
пролетным масс-спектрометром благодаря импульс-                                    Переворот происходит и в системе ввода образцов
ному режиму работы последнего. При этом достижимы                              в масс-спектрометр. Эксперименты с использованием
массы до 5000 при разрешении в 5000. Использование                             мембранных напускных систем вызывают наибольший
приборов ион-циклотронного резонанса и их послед-                              интерес. В научный обиход вошло сокращение MIMS
ней модификации, получившей название масс-спект-                               (от англ. Membrane Inlet Mass Spectromertic Method –
рометрия с Фурье-преобразованием (Furier Transform                             масс-спектрометрические методы мембранного ввода).
Mass Spectrometry, FTMS), позволило проводить изме-                            Этот метод применяется для прямого анализа органиче-
рения в диапазоне до 30 000 а.е.м. При этом сохраняет-                         ских соединений в водных растворах. Сигнал на масс-
ся высокое разрешения на уровне 20 000.                                        спектрометре пропорционален величине потока ана-
                                                                               лизируемого соединения через мембрану. Для анализа
    Серьезную конкуренцию MALDI составляет метод                               газов, растворенных в воде, используются мембраны,
ионизации, получивший название “электрораспыле-                                изготовленные из тефлона, а в случае летучих органи-
ние” (от англ. Electrospray Ionization, ESI – электрорас-                      ческих соединений – из силиконовой резины.
пылительная ионизация). Этот метод ионизации часто                                 В заключение отметим тенденцию, характерную
называют электродинамическим. Ионизация происхо-                               для развития масс-спектрометрии за последние 20 лет,
дит при взаимодействии сильного электростатического                            – движение в сторону больших масс. На первом этапе
поля с поверхностью жидкости на конце капиллярной                              органическая масс-спектрометрия вытесняла неорга-
трубки. В исследуемой жидкости должны быть ионы.                               ническую, а теперь на первое место выходят масс-спек-
Поэтому обычно добавляют небольшие количества                                  тральные исследования больших молекул. Особый ин-
ионных солей или другие соединения, которые могут                              терес вызывают природные соединения, пептиды и
привести к образованию ионов. Так, например, добавка                           протеины, полисахариды и полинуклеотиды. Именно в
амальгамы натрия к раствору смеси фуллеренов в орга-                           эти области применения масс-спектрометрии направ-
ническом растворителе позволила зарегистрировать                               ляются основные капиталовложения.
отрицательные ионы фуллеренов С60 , С70 и С70 + 2n , где n
принимает значения от 1 до 12. Техника ионизации                                     ЛИТЕРАТУРА
MALDI и ESI в сочетании с наиболее мощными совре-
менными масс-анализаторами позволяет успешно оп-                               1. Бейнон Дж. Органическая масс-спектрометрия. М.: Наука,
                                                                               1968.
ределять молекулярные веса таких молекул, как t-RNA
                                                                               2. Сидоров Л.Н. Газовые кластеры и фуллерены // Соросов-
(транспортная рибонуклеиновая кислота) – диапазон                              ский Образовательный Журнал. 1998. № 3. С. 65–71.
масс 25 000 а.е.м., ДНК (дезоксирибонуклеиновая кис-
лота) для последовательности в 100 нуклеотидов масса
                                                                                   Рецензенты статьи Л.А. Асланов, Б.С. Бокштейн
в диапазоне 31 000 а.е.м., белок альбумин – масса в
районе 66 000 а.е.м. При некотором снижении разрешаю-
                                                                                                                    ***
щей способности достижимый диапазон масс составляет
несколько сот тысяч атомных единиц. Здесь уместно                              Лев Николаевич Сидоров, доктор химических наук,
привести цитату из пленарной лекции на конференции                             профессор кафедры физической химии МГУ, зав. ла-
в Будапеште: “ESI и MALDI позволяют получить спек-                             бораторией термохимии, член редколлегии междуна-
                                                                               родных журналов “Rapid Commun. Mass Spectrom.” и
тры нескольких фемтомолей образца с молекулярной
                                                                               “Mass Spectrometry Reviews”. Область научных инте-
массой в несколько сот тысяч атомных единиц. Этот                              ресов – фуллерены и их производные, масс-спектро-
успех открывает перспективу для применения масс-                               метрия, ион-молекулярные равновесия и молекулы с
спектрометрии в медицине, биологии и исследованиях                             большим сродством к электрону. Автор одной моно-
окружающей среды”.                                                             графии и 300 статей.




                  С И Д О Р О В Л . Н . М А С С - С П Е К Т Р О М Е Т Р И Я И О П Р Е Д Е Л Е Н И Е М А С С Ы Б О Л Ь Ш И Х М О Л Е К УЛ   45



    
Яндекс цитирования Яндекс.Метрика